مصري فيت

السلام عليكم ورحمة الله وبركاته نامل ان تكون في اتم صحه وعافيه
مصري فيت

منتدي لعلوم الطب البيطري وما يشملها


    جمع ونقل عينات الفيروسات

    شاطر

    admin
    Admin

    المساهمات : 2529
    تاريخ التسجيل : 22/03/2010
    العمر : 56
    الموقع : O.KATTAB@YAHOO.COM

    جمع ونقل عينات الفيروسات

    مُساهمة من طرف admin في الخميس يناير 10, 2013 11:55 pm

    جمع ونقل العينات لزراعة الفيروسات
    Collection of transport of specimens for virus culture


    المبدأ :
    مختبر تشخيص إصابات الفيروسات يحتاج إلى فهم النشوء المرضي (port hogenesis)للمسبب المتوقع ومعرفة مرحلة المرض والعمر للشخص المصاب أهم عامل هو اختبار العينة المناسبة وجمع العينة بطريقه حذره لضمان عزل نسبة النمو للكائن الحي الملوث (contaminated organism)
    ملاحظه:viability

    اختبار العينات :
    الأفضل ربطه مع مرض معين تشخيصه ،العينة يجب أن تعكس حاله العضو المستهدف قدر الإمكان ،التي عادة تعتمد على الأعراض ألسريريه
    المواد :
    أ_Reagents:
    الوسط الناقل للفيروس (viral transport media) يمنع جفاف العينة ويساعد على الحفاظ على فعالية لفيروس ويعيق نمو الكائن الحي الملوث ()هناك انواع مختلفة من VTM إما أنها مصنوعة خاصة (in house) أو صناعيا

    VTM يتكون من بروتينات مثل Gelatin (Antimicor bi) مضاد للميكروبات في محلول ملحي (Buffered salt somtim) . انبوب VTM عادة يحتوي على2-3 مل من الوسط ،بعض الشركات توفره مع انابيب VTM ماسح جميع العينات

    Leal proof
    أنابيب VTM التي تحتوى على 5-7 مل من الوسط تستخدم لجمع ونقل عينات الأنسجة (Dilution Factor )

    ب_ التجهيزات : supplies

    1. حاويات ((containers معقمه و leat roof ، screw cap منها كأس البول Urine cups وأنابيب الطرد المركزي وأنابيب صغيرة مناسبة 1-2 مل من VTM لتحمل Hold


    2. ماسحات قطن ، Dacron ،tipped ،rayon معقمه مع ماسحات بلاستيك أو ألمنيوم مرنة ذات رأس صغير نستخدم لبعض العينات من ماسحه (urethral swabs).


    3. حقنة Tuberculin مع إبرة مقاس 26 أو 27 لسحب سائل (VESICULAR FLNID)


    4. نستخدم انبيب جمع الدم المانعه للتجلط () التى تحتوي على Heparin

    ج:المعدات : Equipment

    الثلاجة (2-8ºم)
    جمع العينة .A تجمع العينات بأسرع ما يمكن بعد ظهور الأعراض .
    أحسن وقت لسحب العينات خلال 3 أيام من ظهور الاعراض ويقل بعد 5ايام مع كثير من الفيروسات .
    تجمع عينة تشريحية للجثة بعد الموت بأسرع ما يمكن .


    ب: أشير في جدول لجمع العينات مزرعة الفيروسات. عموما يوضع الماسح في أنبوب يحتوي على كمية قليله من
    VTM والقش طر Scrapi وقطع صغيره من الأنسجة إلى أنبوب يحتوي على كمية صغيرة من VTM او محلول ملحي (Saline) .ضع السائل ومعظم العينات ( الانسجه ) إلى حاوية معقمه مانعه للتسرب (leak proof)
    ،أضف كمية من VTM كافية لمنع جفاف الأنسجة .


    ج:اجمع العينات في حاله لتعقيم جيد قدر الإمكان

    د:ضع كل العينة في حاوية مختلفة عليها اسم المريض ورقم الملف ومكان أخد العينة وتاريخ العينة ووقت أخد العينة

    هـ:احصل على تاريخ كامل عن المريض يحتوي على وقت ظهور الإعراض ، الفحص ألسريري ،تاريخ التعرض الأخير ،نوع الناقل للمرض الذي تعرض له ،متى سافر الى ألمنطقه الموبؤه، أخر لقاح.


    نقل العينـــــــــــات:. Specimen transport

    أ-ضع العينة في حاوية محكمة الإغلاق وورقة طلب معملي (request) الى كيس بلاستيكي مخصص لنقل العينات .

    ب- توصل العينات إلى المختبر بأسرع ما يمكن بعد جمع العينات ،حتى لا تفقد قابلية الإصابة (infectivity) مع الوقت ،العينة تحتوي على فيروسات ضعيفة في تخفيف معين كل ذالك نفقد الفيروسات قابلية الإصابة مع تأخير نقل العينة .
    إذا لم يكمن توصيل العينة بأسرع وقت ممكن .

    توضع في الثلاجة (2-8ºم) أو توضع في ثلج رطب او كيس بارد.

    فقدان قابلية الإصابة للفيروسات بطئ في درجة حرارة الثلاجة. لا تجمد العينة .


    ج- إما بالنسبة لمزارع فيروسات الجهاز التنفسي تنقل على الفور الى التلقيح في مزرعة الخلايا .

    Cytomegalovirus و Vericellazoster أيضا هي ضعيفة نسبيا والعينات ممكن إن تفقد قابلية الاصابه سريعا


    د-لا تجمد العينات قبل اختبارها Cytomegelavine وبعض فيروسات الجهاز النفسي سريعا تفقد نشاطها مع التجمد والذوبان .

     حفظها في درجة حرارة -20ºم غير مرض وناجح


     أحفظها في درجة حرارة- 4ºم أو-70ºم.


     ممكن تحسين حياة الفيروسات الضعيفة باستخدام VTMمثل M4 أو HBSS مع Gelatin.

    3: يستخدمsterile tongue depressors لمنع تلوث الماسح باللعاب أثناء سحب العينة .


    שּ الأجهزة :.

    أ- ثلاجة لحفظ VTM وحفظ العينات
    ملاحظه :.تحفظ العينة في الثلاجة في حالة

    ب- تحفظ العينات في "Freezer" على درجة حرارة -70ºم اذا كانت العينة سوف ترسل إلى مختبر خارجي .

    17)إجرات الجودة النوعية :.

    أ- الجودة النوعية للوسط الناقل للفيروسات :. (VTM)

    1- عند استقبال الوسط الناقل للفيروسات نقوم بقياس PH والعكرة وتسجل في ورقه الجودة النوعية وأيضا نتبع الخطوات الموجودة في العلبة الموضحة من الشركة الصانعة للوسط الناقل (Instruction)

    أيضا نقوم بتسجيل رقم القطعة (lot number ) وتاريخ الانتهاء وتاريخ فتح VTM وتاريخ التخلص من VTM ويحفظ ذالك في ملف الجودة النوعية .

    2- نقوم بقياس PH والعكرة للأنابيب المستخدمة من VTM من فترة لأخرى وتقوم بتلقيح (Inoculate) VTM إلى الخلايا بالتوازي مع العينات للتأكد من تأثير VTM على الخلايا من عدمه .


    ب)توثيق التدريب لسحب العينات :.

    1- التوثيق لإثبات كل الأشخاص الذين يجمعون مسحات الحلق مدربين جيدا .
    2- توثيق أن المرضى قد فهموا من الأشخاص المسئولين عن جمع العينات عن طبيعة جمع العينات .

    ج) مراقبة أداء الأجهزة :.

    تسجيل درجة الحرارة يوميا للثلاجة (Refrigerator) و -70ºم للمجمدات (Freezer) التي نستخدم لحفظ VTM والعينات عم طريق الأشخاص المسئولين عن جمع العينات وتحفظ في ملف خاص لمراقبة الثلاجة والمجمدة .

    7- خطــــوات جمع العيـنـــــات :.

    أ: توثيق المريض Patient Documentation
    1- يعبأ نموذج التقرير للمريض قبل سحب العينة .
    2- للتأكيد, يسأل المريض عن أسمة ورقم الملف .
    3-تسجيل باقي المعلومات على نموذج التقرير للمريض .


    ب:التحضــير قبل سحب العينة :.

    1- يجب حفظ إل(VTM) الوسط الناقل للفيروس في ثلاجة بين درجة حرارة 2-8ºم ,الكاس مع الثلج يجب أن يكونا قريبين من مكان سحب العينة .

    2- قبل الاستعمال , تراقب أل (PH) والعكرة للـ ( VTM) .
    الأنبوب يجب أن يكون واضح ووردي (salmon pink)

    3- التأكد من سلامة الماسحة قبل استخدامها .

    ج: جـــمع العينــــات :.

    1- مسحة الحلق :.(throat swab)
    استخدم التقنية المعقمة , اضغط على اللسان إلى أسفل بستخدام الخشبة المعقمه لتمنع تلوث العينة باللعاب .

    امسح بشدة باستخدام الماسح على اللوز (tonsils) ومن الحلق من الناحية الخلفية .

    2- مسحة الأنف :.(nasal swab)
    أ-أدخل الماسحة بحذر في الأنف إلى مسافة 1 سم امسح غشاء الأنف بشدة قليلا بطريقة دائرية واترك الماسح داخل الأنف لمدة 10-15 ثانية .


    ب- غطي الأنبوب بإحكام وضع معلومات المريض على الأنبوب .

    ج- تأكد من معلومات التي على التقرير أن كانت مطابقة للمعلومات التي على الأنبوب .

    ملاحـــظة :.
    1- جمد الأنبوب مع مسحة الحلق عند درجة حرارة -70ºم بأسرع ما يمكن . إذا هذا ليس ممكن , أحفظها في الثلاجة ثم ننقلها إلى المجمدة في مدة 12 ساعة على الأكثر .

    2- دائما ضع العينة بعد أخذها في الثلج الرطب او في كيس بارد أثناء نقل العينة إلى المجمدة (70&ordm.

    3- أحفظ العينة في المجمدة حتى استخدامها .

    د) نقل العــيـنـــة :.

    1- طريقة نقل العينات: Specimen Transport

    ا: تأكد ان هناك على الأقل 8 مكعبات من الثلاجة .ثبت أنبوب نقل الفيروسات في الحاوية (container)وضع عليها مكعبات الثلج الجاف .

    ب:انقل العينة بأسرع مايمكن قبل ذوبان الثلج .

    17- مـــلاحـــــظــــــه مهمة /

    ا- حيث أن الفيروسات كائنات حية مرتبطة بالخلايا , تأكد من اخذ كميات كافية من الخلايا المصابة أثناء سحب العينة .
    للتأكد من ذالك عليك اخذ العينة بشدة من اللوز والحلق وليس مجرد لمس المنطقة وتجنب لمس المناطق الأخرى مثل اللسان ,الفم .
    ب- الفيروسات لا تحتمل الحرارة (Heat-labile) لذلك يجب حفظها في درجة حرارة باردة بعد جمعها فورا.

    ج- مهم جدا أن نتذكر أن الفيروسات تفقد قابلية الإصابة "infectivity" مع التجميد البطيء وتجمدها عند درجات حرارة عالية مثلا (-10)-(-20)ºم . العينة يجب حفظها عند درجة حرارة -70ºم حالا بعد جمعها عندما لا يمكن معالجتها وتلقيحها (Processing & inoculation) خلال 12ساعة .

    د- الأمان :. "Safety"
    1- دائما البس القفازات (gloves) والبالطو (coat) إثناء معالجة العينات .

    2- استخدم الكلوركس أو 70% إيثانول لتطهير الأسطح .

    مــــلاحظـــة :.
    يعتبر كل من 70% ايثانول والكلوركس مطهرات فعالة . انتظر 10 دقائق عند استخدام الكلوركس أما 70% ايثانول أسرع فعالية من الكلوركس.




    • خطوات جمع العينات :.


    • استخدم الإجراءات الوقائية العالمية (universal precaustions) عند جمع أي عينة.


    • اكتب اسم المريض ورقم الملف وتاريخ جمع العينة ونوع الماسح عن أنبوب نقل عينة الفيروس .


    • استخدم لكل منطقة جمع (collection site) ماسح معقم (sterile swab) مختلف .


    • ضع كل ماسح في أنبوب مختلف يحتوي على 1-3 مل من الوسط الناقل للفيروساتVTM .


    • تأكد من إحكام الغطاء لكي لا تتسرب العينة .












    Whole Blood For PCR

    أ- الأدوات : Supplies

    1: 5-7 مل دم كامل في أنبوب EDTA أوِACD .
    2: أدوات وخز الوريد (venipuncture)
    3: أنبوب 2 مل غير زجاجي للمصل .


    ب- خطوات جمع العينات :.

    1- استخدم إجراءات الوقاية العالمية عند جمع أي عينة حيوية .
    2- اكتب اسم المريض ورقم الملف وتاريخ جمع العينة ونوع الماسح .
    3- اجمع 5-7 مل من الدم الكامل .
    4- اكتب معلومات العينة على أنبوب 2مل بلاستيكي :.
    *اسم المريض أو ID
    *تاريخ جمع العينة .

    د- امزج العينة ثم انقل 1-2 مل من الدم الكامل إلى أنبوب تخزين .

    ج- تـخزيـن العينات :.

    1- الدم الكامل يخزن في الثلاجة (2-6ºم) إلى أسبوع واحد .

    2- لا تجمد العينة .
    منقول

      الوقت/التاريخ الآن هو الخميس ديسمبر 14, 2017 6:26 am